■ 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Y1HGold-GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)使用的菌株 Y1HGold 是 MATα 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行篩庫(kù)試驗(yàn)。篩選標(biāo)記為: ura3 ，leu2 ；報(bào)告基因?yàn)椋篈bAr 。
Y1HGold-GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)需要 pAbAi 和 pGADT7 兩種質(zhì)粒配套使用。質(zhì)粒 pAbAi 的篩選標(biāo)志為 URA，用于表達(dá) pBait-AbAi construct (1~3 個(gè) bait DNA 序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到 pAbAi 中)；質(zhì)粒 pGADT7 的篩選標(biāo)志為 LEU，用于表達(dá) AD(GAL4 C 端 768~881 位氨基酸) 與目標(biāo)蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)原理：Aureobasidin A (AbA) 是一 種環(huán)酯肽抗生素，在低濃度(0.1-0.2 μg/mL) 下即可對(duì)酵母產(chǎn)生毒性?；蚪M中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株（Bait-Reporter Yeast Strains），當(dāng)獵物蛋白（Prey）結(jié)合到誘餌序列 （Bait DNA）上，GAL4 AD 就會(huì)激活 AbAr 的表達(dá)，從而能夠在含有抗生素 AbA 的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。AbAr 與營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn)，可以降低酵母單雜假陽性發(fā)生的概率。
本方案中篩選誘餌酵母菌株的 AbA 最佳使用濃度和互作驗(yàn)證都采用了稀釋點(diǎn)板的方法，與涂板的方法相比，點(diǎn)板法能更直觀的體現(xiàn)出 DNA 和蛋白的互作，還能減少培養(yǎng)基和 AbA 的使用量。本方案中誘餌菌株鑒定采用了高保真酶，大大減少了操作步驟。
■ 質(zhì)保及運(yùn)輸條件：
培養(yǎng)基系列質(zhì)保 2 年，感受態(tài)制備試劑盒質(zhì)保 1 年、鑒定試劑盒質(zhì)保 1 年、甘油菌質(zhì)保 1 年、感受態(tài)質(zhì)保 3 個(gè)月；感受態(tài)干冰運(yùn)輸，其余產(chǎn)品冰袋運(yùn)輸；各類產(chǎn)品按照標(biāo)簽所表示溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。
注：
1. 本試劑盒提供的產(chǎn)品以產(chǎn)品組成為準(zhǔn)。大概能用于 10 對(duì)單雜互作驗(yàn)證，例如，1 個(gè)誘餌和 10 個(gè)轉(zhuǎn)錄因子（質(zhì)粒除外）。
2. 請(qǐng)按照感受態(tài)的需求量制備感受態(tài)，ZC135 中的試劑加入量可以按比例放縮。
3. 各組分需按照標(biāo)簽溫度儲(chǔ)存，感受態(tài)細(xì)胞務(wù)必 -80℃ 保存。
4. 對(duì)照菌株的最佳 AbA 濃度參考網(wǎng)站菌株說明書。
6. 感受態(tài)細(xì)胞配帶有 Carrier DNA 和 PEG/LiAc。
7. 載體序列，在我司網(wǎng)站可以下載。
